尊龙凯时小鼠少突胶质前体细胞培养说明书
一、细胞培养条件
细胞名称：MOPC小鼠少突胶质前体细胞
生长特性：贴壁生长
冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：DMEM + 10% FBS + 1% 双抗
传代方法：第一次建议1:2传代。传代情况每两天更换培养基。备注：用无菌离心管收集培养基，留作过渡对比培养。如对比培养效果不理想，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。
二、细胞收到后的处理
在细胞培养至良好状态后，灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方法。收到细胞后，用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，随后放入超净台内进行严格无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行处理。使用显微镜观察细胞生长情况，并对不同倍数拍照保存（建议40x、100x、200x各一张）。前三天的照片为重要的售后依据，如未提供照片，则默认收到状态良好。
注意：密封培养瓶放入培养箱时请将盖子拧松，传代后建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自己配制的完全培养基，以便进行对比培养。
三、细胞培养步骤
a. 细胞传代
若细胞未超过80%汇合度，收集培养液至离心管中，保留5ml完全培养基，并放入37℃、5% CO2孵箱中培养；若细胞密度超过80%，可进行传代培养，具体步骤如下：
- 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS冲洗细胞1-2次。
- 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况，若大部分细胞变圆并脱落，迅速取回操作台，轻敲培养瓶后加入5ml以上完全培养基以终止消化。
- 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，与悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2 ml完全培养基重悬。
- 将细胞悬液按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），添加新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。
b. 细胞冻存
- 细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次。
- 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，观察细胞变化，待细胞回缩变圆后添加5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打使其脱落，转移悬液至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
- 弃去上清后，将沉淀细胞加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
- 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，如需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上后再转移。
c. 细胞复苏
- 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速放入37℃水浴中解冻，直至无结晶，然后用75%酒精擦拭冻存管外壁。
- 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
- 弃去上清，用5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶中，并放于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
- 第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。
四、注意事项
有些细胞贴壁不牢，在运输过程中可能出现细胞脱落现象，这属于正常情况。如有过多脱落，可将培养瓶中的所有培养液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟，收集上清作过渡培养。沉淀中加入胰酶1-2 ml，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后，再添加5ml完全培养基以终止消化，离心后弃去上清，重新用1-2 ml完全培养基重悬。最后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
五、售后条款
1）细胞出现问题可以重发的情况与判定标准：
1. 细胞在运输过程中遇到问题，如丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，可重发；
2. 若细胞出现污染问题，请在收到产品48小时内提供真实的实验结果，经核实后可重发；
3. 常温发货的细胞在静置24小时或干冰冻存发货的细胞复苏后24小时，若绝大多数细胞未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片），可重发；
4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时或常温发货的细胞未开封静置4小时内出现污染问题，可重发；
5. 细胞活性问题需在收到产品7天内提供真实实验结果，使用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经核实后可重发；
6. 收到细胞当天及第2、3天需拍照，若未告知，则视为产品合格。4-7天内出现问题需提供前3天照片及操作详细步骤，由技术人员判定责任后可重发。
2）细胞出现问题不予重发的情况包括：
1. 客户造成的细胞污染，不予重发；
2. 客户错误操作导致细胞状态不佳，不予重发；
3. 使用非本库推荐的细胞培养体系导致的细胞状态不佳，不予重发；
4. 细胞状态不佳且未提供培养前3天照片，不予重发；
5. 细胞培养过程中经过其他处理，不予重发；
6. 收到后2天内未告知，不予重发；
7. 具体情况而定。
津公网安备 12011302120117