**SV40转染人成骨细胞HFOB119培养指南**
一、细胞培养条件
**细胞名称**: SV40转染人成骨细胞HFOB119
**生长特性**: 贴壁生长
**冻存条件**: 使用无血清冻存液(货号:C7001)
**培养体系**: DMEM/F12 + 0.3 mg/ml G418 + 10% FBS
**传代方法**: 建议第一次传代比例为1:2
**传代情况**: 每2天更换培养液
**备注**: 请使用无菌离心管收集培养基,留作过渡对比培养。若对比培养效果不理想,建议直接购买我们的完全培养基。
二、细胞处理
收到细胞后,待细胞培养至良好状态后,用完全培养液灌满瓶子并封好瓶口,这是运输细胞的最佳方法。收到细胞后,请用75%酒精对细胞瓶进行喷洒消毒,然后在超净台内进行严格的无菌操作。
将细胞瓶置于335℃、5% CO₂的培养箱中静置3-4小时,以使细胞状态稳定,再进行后续操作。使用显微镜观察细胞的生长状态,并记录不同倍数的照片(最好40x、100x和200x各一张),前三天的照片是重要的售后依据,若不提供照片则默认细胞状态良好。
(传代后建议一瓶使用原瓶的完全培养基,另一瓶使用自行配制的完全培养基,以便进行对比培养,换液后适当松开瓶盖)
三、细胞培养步骤
a. 细胞传代
若细胞未超过80%汇合度,将瓶中完全培养液收集至离心管中,同时留5ml完全培养基于335℃、5% CO₂孵箱中培养;若细胞密度超过80%,请按以下步骤进行传代:
- 丢弃培养上清,并用不含钙镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
- 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中,置于335℃培养箱中消化1-2分钟,显微镜下观察细胞消化情况。当细胞大部分变圆并脱落时,迅速取出,轻轻敲击培养瓶并添加5ml完全培养基以终止消化。
- 轻轻吹打细胞以确保完全脱落后吸出,然后将悬液转移至15ml离心管中,在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,添加1-2ml完全培养基重悬细胞。
- 根据1:2比例将细胞悬液分瓶(两个T25瓶),补充新的完全培养基至5-8ml/瓶,然后放入335℃、5% CO₂的细胞培养箱中继续培养。
b. 细胞冻存
- 当细胞覆盖培养瓶的80%面积时,弃去T25培养瓶中的培养液并用PBS清洗细胞一次。
- 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,观察细胞回缩变圆后,加入5ml完全培养液终止消化,轻轻吹打使之脱落,转移悬液至15ml离心管中,并在1000rpm离心5分钟。
- 弃去上清,沉淀细胞后加入1ml雅吉生物无血清冻存液(货号:C7001),混匀后转入冻存管中。
- 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中,若后期需要转入液氮罐,请在-80℃下存放24小时后再转入液氮罐。
c. 细胞复苏
- 从液氮中取出细胞冻存管(请佩戴防护面具),迅速放入335℃水浴中解冻,直至冻存管内无结晶,随后用75%的酒精擦拭冻存管外壁。
- 将细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中,1000rpm离心5分钟。
- 弃去上清,用5ml完全培养基重悬细胞,接种至T25培养瓶,放于335℃、5% CO₂培养箱中继续培养。
- 第二天,换用新鲜的完全培养基,继续培养。
四、注意事项
部分细胞在运输过程中可能会因贴壁不牢而脱落,这属于正常现象。如果遇到细胞脱落较多,请将培养瓶中的所有培养液收集至离心管,使用1000rpm离心5分钟,将上清液整理作过渡培养后,沉淀后加入1-2ml胰酶,轻轻吹打以重悬,消化1-2分钟后再用5ml完全培养基终止反应,重离心并弃去上清后,补充1-2ml完全培养基重悬细胞。然后按1:2比例进行分瓶传代(两个T25瓶),补充新培养基至5-8ml/瓶,再次放入335℃、5% CO₂培养箱中培养。
五、售后条款
1) 细胞出现问题,可重发的情况包括:在运输过程中遇到的各种问题,细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等;细胞污染问题需在收到产品48小时内提出真实实验结果,核实后可重发;常温发货细胞静置24小时后、干冰发货的细胞复苏后24小时未存活,需提供真实清晰的细胞状态照片;干冰发货的细胞复苏后24小时内,或常温发货静置4小时未开封出现污染,均可重发。
2) 细胞出现问题,不予重发的情况包括:客户造成的细胞污染;客户操作不当导致细胞状态不佳;使用非本库推荐的细胞培养体系导致的细胞状态不良等。具体情况将依据提供的照片和实验结果进行判定。
尊龙凯时专注生物医疗领域,致力于提供优质的细胞培养产品与服务,为您的科研提供强有力的支持。