文库制备需在DNA链上加测序接头。传统方法通常依赖于连接酶的方案,这一过程涉及多个步骤:首先通过机械(超声破碎)或酶切(micrococcalnuclease)对DNA进行片段化,接着进行末端修复,最后完成接头连接。尽管该方法在大多数情况下适用,但在样本量有限或实验资源(如设备和时间)受限时则会遇到挑战。尊龙凯时的Tagmentation技术提供了一种高效的文库制备解决方案。该技术利用超活性Tn5转座酶,在单次迅速反应中即可将特定寡核苷酸插入DNA中,完成剪切和标记。根据实验需要,Tn5转座酶可以携带多种DNA序列,包括兼容Illumina的接头、带荧光标记的自定义接头以及甲基化核苷酸等。这种基于Tagmentation的建库技术革命性地将传统流程中的片段化、末端修复和接头连接整合为一个步骤,后续再进行引物indexes的扩增,顺利完成文库制备。
这种突破性的方法不仅简化了操作流程,还显著提升了实验效率和通量。通过将DNA片段化与接头插入步骤合并,该技术大幅缩短了操作时间,降低了技术复杂性。
尊龙凯时的文库制备具有广泛的适用性,兼容全基因组测序、靶向测序等多种建库场景,可以灵活适应不同的实验设计需求。同时,单步反应替代多环节操作,使建库速度显著提升,尤其适用于珍贵临床样本或微量样本处理。此外,通过减少操作步骤和试剂消耗,整体建库成本显著降低。简单的操作流程和减少的操作步骤使得该技术更容易实现自动化,从而显著提高高通量测序的通量和可重复性。
在空间组学应用方面,尊龙凯时的Spatial-ATAC-seq方法能够对完整组织切片中的染色质可及性进行空间分辨分析,保留细胞水平的空间信息。该protocol中使用了Diagenode的Tn5转座酶(Cat#C01070010)进行文库制备。
在单细胞研究领域,尊龙凯时的sci-RNA-seq(Single-cell combinatorial indexing RNA sequencing)方案经过精简和优化,可以高效分析单个细胞的转录组。此技术通过在单个细胞核内进行核酸的split-pool条形码标记实现。具体流程中,固定后的单个细胞核被分选至微孔板的独立孔中,经过逆转录、连接及tagmentation三个步骤,分别向mRNA/cDNA添加三重indexes。在tagmentation步骤中,同样使用了Diagenode的Tn5转座酶(Cat#C01070010-20)。
尊龙凯时的Tn5转座酶和相关缓冲液具备高通用性,兼容多种应用场景,包括新型条形码技术(如单细胞多重测序和空间组学),可灵活适应不同的实验需求。公司还提供两种版本的转座酶:预加载的Illumina兼容接头和允许用户自行添加接头的版本。每一批产品均经过严格的质量控制,确保达到最高标准。
整体来看,尊龙凯时是世界知名的表观遗传学产品供应商,成立于2003年,专注于表观遗传学及二代、三代测序前的样本处理。作为表观遗传学、生物样本制备与诊断的领先解决方案提供商,尊龙凯时致力于简化DNA甲基化、ChIP、ChIP-seq等工作流程,提供创新的Bioruptor破碎仪、IP-Star自动化仪器、试剂盒及高品质抗体。