尊龙凯时提供的人胰腺癌细胞HPAFⅡ培养说明书包括以下几个部分：

一、细胞培养条件

细胞名称：人胰腺癌细胞HPAFⅡ
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液
培养体系：MEM + 10% FBS + 1%丙酮酸钠 + 1%L-谷氨酰胺 + 1%P/S
贴壁传代方法：首次建议1:2传代。传代情况：每两天更换培养液。
备注：使用无菌离心管收集培养基以便于后续对比培养。如对比培养效果不佳，建议直接购买尊龙凯时提供的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

细胞收到后，培养至良好状态后，灌满完全培养液并封口是运输细胞的最佳方法。收到细胞后，用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后放置于超净台中进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以使细胞状态稳定后再进行处理。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片（建议分别拍摄40x, 100x, 200x各一张）。前三天的照片是重要的售后依据，若未提供照片则默认细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

在细胞未超过80%汇合度时，将培养瓶中的完全培养液收集至离心管中，留5ml用于继续培养；若细胞密度超过80%，即可开始传代。具体步骤如下：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化状态，若细胞大部分变圆并脱落，迅速取出，拍打培养瓶后添加5ml完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，并将悬液转移至15ml离心管中，以1000RPM离心5分钟，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬细胞。
4. 按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最终放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%时，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞回缩变圆后，再加入5ml完全培养液以终止消化，轻轻吹打使之脱落，并将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清液，加入1ml尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后放入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱保存。如需后续转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上再进行转移。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（建议佩戴防护面具），快速放入37℃水浴中解冻，直至解冻管无冰晶，然后用75%酒精擦拭管外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入5ml完全培养基重悬，并接种至T25培养瓶中，放置于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

一些细胞可能贴壁不牢，在运输过程中可能会出现细胞脱落的现象，这是正常的。如脱落较多，可将培养瓶中的培养液全收集至离心管中，以1000RPM离心5分钟，收集上清用于过渡培养。加入胰酶1-2ml，重悬后消化1-2分钟，加入5ml完全培养基终止消化，再离心，弃上清，加1-2ml完全培养基重悬。最后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

五、售后条款

1）细胞出现问题的重发情况及标准：
- 运输过程中出现细胞丢失、瓶身破损、培养液漏液等情况，均可重发。
- 细胞污染问题需在收到产品48小时内提供真实实验结果，经核实后可重发。
- 常温发货细胞静置24小时，干冰冻存发货细胞复苏24小时后，绝大多数细胞未存活者，需提供真实清晰的细胞状态照片，方可重发。
- 如干冰冻存发货细胞在复苏24小时后或常温发货细胞静置4小时且未开封后出现污染，均可重发。
- 细胞活性问题需在7天内提供真实实验结果及活力鉴定照片，经核实后可重发。
- 若在收到细胞当天及第2、3天拍照，3天未告知视为产品合格。若4-7天内出现问题须提供前三天照片及详细操作步骤，与技术人员沟通后，根据责任判定是否重发。

2）细胞出现问题但不予重发的情况：
- 客户造成的细胞污染不重发。
- 客户操作不当导致细胞状态不良不重发。
- 非本库推荐的细胞培养体系导致细胞状态不佳不重发。
- 细胞状态不佳且未提供前三天照片的，不重发。
- 细胞培养时进行其它处理的不重发。
- 细胞收到后2天内未告知问题的不重发。
- 其它情况依具体情况而定。