细胞培养与传代指导

在细胞培养的过程中，选择合适的培养条件至关重要。我们建议使用尊龙凯时提供的气相条件，即95%的空气和5%的二氧化碳，培养温度维持在37℃。

传代方法

首次传代时，建议采用1:2的比例进行传代。经过两天培养后，我们将进行换液操作。在收到细胞后，请确保在细胞状态良好后用完全培养液灌满瓶子并封口，这样可以有效保护细胞的运输。

在收到细胞时，请勿立即打开瓶盖。务必核对培养瓶上标注的细胞名称与您订购的一致，并检查瓶体是否有破损或漏液情况。如果未发现异常，可以使用显微镜观察细胞生长情况，并记录不同倍数（如40x、100x、200x）下的细胞照片。前三天的照片将作为售后依据，在未提供照片的情况下，将默认细胞状态良好。

贴壁细胞传代步骤

1. 弃去培养上清，用不含钙和镁的PBS清洗细胞1-2次。
2. 添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，并在显微镜下观察消化状态。如果细胞大部分变圆并脱落，迅速带回操作台，轻敲培养瓶后加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出悬液，转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5%CO2细胞培养箱中继续培养。

悬浮细胞传代步骤

1. 半换液法：竖着放置培养瓶在培养箱中静置约1小时，轻轻吸除约3ml的培养基，然后补充3ml的完全培养基。如果培养基变色较慢，可直接添加约500ul FBS，传代时也可直接补充5ml培养基，通常进行3次后可进行离心传代以去除死细胞。
2. 离心换液法：将细胞悬液收集到离心管中，在1000rpm下离心5分钟，弃去上清，加入1-2ml培养液后重悬，将细胞悬液按1:2比例分到新的T25瓶中，添加6-8ml新配置的完全培养基以保持细胞生长活力，后续传代可根据实际情况调整为1:2到1:5的比例。

细胞冻存与复苏

1. 当细胞生长达培养瓶的80%时，弃去培养液，用PBS清洗一次。
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞状态后，加入5ml完全培养基以终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，转移至15ml离心管，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清后，将细胞沉淀与1ml 尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001）混合，放入冻存管中。
4. 将冻存管直接放入-80℃冰箱，若需转移至液氮罐，需在-80℃存放24小时后再进行转移。

注意事项

在运输过程中，细胞可能因粘附不牢而脱落，这是正常情况。如细胞脱落较多，可将培养液收集到离心管中，进行处理。若您在收到细胞后72小时内未反馈情况，将视为细胞状态合格。

问题处理政策

对于细胞出现的各种问题，尊龙凯时制定了明确的重发政策。若在运输过程中出现细胞丢失、瓶身破损等问题，我们将重发细胞。若因客户操作不当或培养体系不合适导致细胞损坏，将不予重发。如在收到细胞后您有任何问题，请及时与我们联系。

通过遵循以上步骤及注意事项，可以有效确保细胞培养的顺利进行。如需帮助，欢迎随时与尊龙凯时的技术支持团队联系。